رات الجلوتاثيون المختزل ، GSR إليسا كيت

رات الجلوتاثيون المختزل ، ضريبة السلع والخدمات إليسا كيت

مبدأ التجربة

انزيم مرتبط المناعي فحص ( ELISA ) كان يستخدم للكشف عن نشاط الجلوتاثيون المختزل ( GSR ) في الفئران . الأجسام المضادة ضد الفئران GSR مغلفة في لوحة microporous . بعد إضافة عينة اختبار ، GSR ملزمة المغلفة الأجسام المضادة . في وقت لاحق ، biotinylated الكشف عن الأجسام المضادة أضيفت إلى شكل " antigen-enzymic الأجسام المضادة " معقدة . بعد إضافة هورس راديش پراكسيداز ( HRP ) المسمى streptavidin ( SABC ) ، الامتصاصية ( OD ) يتحدد في الطول الموجي 450nm TMB الركيزة .

تكوين عدة

تكوين 48 حفرة التكوين 96 حفرة التكوين حفظ الشرط

قبل المغلفة لوحة enzymic 8 × 6 8 × 12 2-8 ℃ . . . . . . .

معيار ( تجميد المجفف ) 1 فرع 1 فرع 2-8 درجة مئوية

معيار / عينة مخفف 10ml 15ml 2-8 ℃ . . . . . . .

الكشف عن الأجسام المضادة البيوتين 60 ميكرولتر ( 100 × 120 ميكرولتر ( 100 × 20 ℃ )

biotinylated الضد المخفف 6ml 12ml 2-8 ℃ . . . . . . .

مجمع SABC 6ml 12ml 2-8 درجة مئوية

TMB لون السائل ( أ / ب ) 3 مل و 6 مل على التوالي

إنهاء السائل 6 مل 12 مل 2-8 درجة مئوية

20 * سائل غسيل مركزة 30ml 60ml في درجة حرارة الغرفة

ختم لوحة الفيلم 2 قطعة 4 قطعة في درجة حرارة الغرفة

نسخة من التعليمات

ثالثاً - تجهيز العينات

عينة المصل / البلازما

الدم كله في درجة حرارة الغرفة لمدة 2 ساعة أو 4 ℃ بين عشية وضحاها ، 1000g الطرد المركزي لمدة 20 دقيقة ، طاف .

تجنب انحلال الدم أو فرط شحوم عينات ، 2-8 ℃ يمكن تخزينها لمدة 48 ساعة . الحفاظ على المدى الطويل يتطلب - 20 ℃ أو - 80 ℃ لتجنب تكرار التجميد والذوبان .

عينة الأنسجة / الخلايا

بعد خليط الأنسجة أو انقسام الخلايا ، طاف كان الطرد المركزي و تركيز البروتين تم تعديلها إلى النطاق الموصى به .

الخطوات التجريبية

المنظفات السائلة

تمييع 20 × تركيز محلول الغسيل مع الماء المقطر 20 مرة ( على سبيل المثال ، 1 مل تركيز + 19 مل من الماء المقطر ) .

المعيار المخفف

سبعة أنابيب الطرد المركزي ، 1 / 2 ، 1 / 4 ، 1 / 8 ، 1 / 16 ، 1 / 32 ، 1 / 64 ، فارغة .

كل أنبوب يضاف 200 ميكرولتر القياسية / عينة مخفف ، أول أنبوب يضاف 200 ميكرولتر القياسية الأصلي ، ثم يخلط جيدا و تضعف تدريجيا .

إضافة عينة الحضانة

100 ميكرولتر القياسية أو عينات أضيفت إلى كل حفرة ، احتضان في 37 ℃ لمدة 90 دقيقة .

تخلص من السوائل وغسلها ثلاث مرات ( 1-2 دقيقة في كل مرة ) .

رد فعل الأجسام المضادة انزيم المسمى

100 μ ل biotinylation أضيفت إلى كل حفرة ( تمييع 1 : 100 ) و حضنت في 37 ℃ لمدة 60 دقيقة .

غسل 3 مرات .

رد فعل مجمع SABC

100 ميكرولتر SABC مجمع أضيفت إلى كل مسام و حضنت في 37 ℃ لمدة 30 دقيقة .

غسل 3 مرات .

اللون و إنهاء

إضافة 90 μ ل TMB الحل ( أ / ب ) في كل حفرة ، احتضان في 37 ℃ لمدة 15 دقيقة .

إضافة 50 μ ل إنهاء الحل في كل حفرة ، ثم قياس مباشرة بعد الاختلاط .

خامساً - حساب النتائج

معيار المنحنى هو رسمها مع تركيز معيار الإحداثي السيني ( س ) و التطوير التنظيمي قيمة الإحداثي الطولي ( ذ ) .

وفقا لعينة من التطوير التنظيمي ، ونحن استبدال منحنى القياسية المعادلة لحساب GSR التركيز .

سادساً - نقاط الاهتمام

الكاشف حفظ

معيار البيوتين الأجسام المضادة يجب أن تكون مخزنة في - 20 ℃ لتجنب تكرار التجميد والذوبان . المكونات الأخرى هي الحفاظ على 2-8 ℃ . . . . . . .

معالجة العينات

تجنب استخدام الدم ، فرط شحوم أو عكر عينات . عينات الأنسجة يجب أن تكون مختلطة تماما .

مواصفات التشغيل

نقل السوائل يجب أن تكون دقيقة لتجنب التلوث الصليب . غسل السائل المتبقية تؤثر على النتيجة .

أداة معايرة

الطول الموجي من الإنزيم المسمى الصك يجب معايرة 450nm فارغة ثقب صفر .

حماية الأمن

إنهاء السائل يحتوي على حمض الكبريتيك ، وارتداء القفازات والنظارات أثناء العملية .

سابعاً - النتائج المتوقعة

الحساسية : يمكن الكشف عن انخفاض 0.156ng / ml ضريبة السلع والخدمات .

المدى الخطي : 0.156-10ng / ml .

ثامناً - نطاق التطبيق

كاشف عدة مناسبة لأنّ كمي كشف GSR في مصل الدم ، بلازما الدم ، والأنسجة خليط خلية ثقافة طاف من الفئران .

ملاحظة : يرجى قراءة التعليمات كاملة وتأكد من سلامة المكونات قبل التجربة .

ملاحظة : أعلاه هو فقط لأنّ مرجع , هذا الكاشف هو فقط لأنّ البحث العلمي و لا تستخدم البيانات الفعلية .