حقوق الإنترفيرون غاما ، الإنترفيرون غاما طقم إليسا 96t

إليسا عدة حقوق الانترفيرون غاما ، الإنترفيرون غاما

مبدأ الكشف

طقم إليسا الأضداد شطيرة مزدوجة ( إليسا ) . الأجسام المضادة وحيدة النسيلة المضادة للإنسان الإنترفيرون جاما قبل المغلفة على لوحة microporous ، عينة ، ومعيار البيوتين المسمى الكشف عن الأجسام المضادة هي بالتسلسل المضافة لتشكيل الأجسام المضادة للمستضد انزيم المسمى الضد المعقدة . بعد الغسيل ، streptavidin HRP المسمى هورس راديش پراكسيداز أضيفت إلى الجمع بين الألوان من خلال TMB الركيزة . هناك علاقة طردية بين عمق اللون و تركيز الإنترفيرون γ في العينة .

تكوين عدة

تكوين 96 حفرة التكوين 48 حفرة التكوين حفظ الشرط

قبل المغلفة microporous لوحة 12 حفرة × 8 12 حفرة × 4 بار 2-8 ℃ . . . . . . .

تجميد المجفف القياسية 1 أنبوب 1 أنبوب 2-8 ℃ ( بعد حل - 20 ℃ )

البيوتين المسمى الأجسام المضادة 100 ميكرولتر 100 ميكرولتر 2-8 ℃ ( ضوء المأوى )

streptavidin-hrp 100 μ ل 100 μ ل 2-8 ℃ ( ضوء المأوى )

عينة مخفف 30ml 15ml 2-8 ℃ . . . . . . .

20 * غسل العازلة 20 مل 10 مل 2-8 درجة مئوية

TMB الركيزة الحل 10ml 5ml 2-8 ℃ تجنب الضوء

إنهاء السائل 10ml 5ml 2-8 درجة مئوية

لوحة ختم الفيلم 4 صحائف 2 درجة حرارة الغرفة

متطلبات العينة

1 . نوع العينة

مصل / بلازما الدم : استخدام EDTA أو الهيبارين لمنع تخثر الدم ، وتجنب انحلال الدم .

خلية ثقافة طاف : الطرد المركزي لإزالة الجسيمات ، وتجنب تكرار التجميد والذوبان .

السوائل البيولوجية الأخرى : مثل السائل النخاعي ، والاستسقاء الجنبي ، تحتاج إلى توضيح بعد الاختبار .

2 - تجهيز العينات

نسبة التخفيف : 1 : 5 في المصل / البلازما ( عينة : المخفف = 1 : 4 ) و 1 : 2 في supernatants . . . . . . .

ظروف التخزين : على المدى القصير ( ≤ 7 أيام ) 2-8 ℃ التخزين ، التخزين على المدى الطويل في - 80 ℃ ( تجنب تكرار التجميد والذوبان ) .

الخطوات التجريبية

إعداد الكواشف

الغسل : تمييع 20 × التركيز في 1 × سائل العمل ( على سبيل المثال ، 20 مل + 380 مل من الماء ) مع الماء المقطر .

الحل : إضافة 1 مل من محلول مخفف من تجميد المجفف القياسية ، وترك لمدة 15 دقيقة .

تمييع التدرج : سبعة الجيش الشعبي أنابيب أضيفت 500 ميكرولتر من تمييع في كل أنبوب ، ثم نقل 500 ميكرولتر من الأم إلى أنبوب واحد ، ثم تمييع ( على سبيل المثال : 1000 → 500 → 250 → 125 → 62.5 → 31.25 → 15.625 بيكوغرام / مل ) .

2 - إضافة عينات و درجة الحرارة

100 ميكرولتر القياسية أو المخفف عينات تضاف إلى كل حفرة .

37 ℃ تجنب الضوء و درجة الحرارة لمدة 90 دقيقة ، وختم لوحة فيلم الختم .

3 . غسل

رمي السائل في حفرة ، يغسل مع 1 × سائل الغسيل ثلاث مرات ، نقع لمدة 1 دقيقة في كل مرة ، بات الجافة .

4 . اللون و إنهاء

100 μ ل البيوتين المسمى الضد أضيفت إلى كل مسام ( 1 : 100 تمييع الضد المخفف في وقت مبكر ) لمدة 60 دقيقة في 37 ℃ . . . . . . .

بعد الغسيل ، 100 μ ل streptavidin-hrp أضيفت إلى كل مسام ( المخفف مع اي بي سي 1 : 100 في وقت مبكر ) لمدة 30 دقيقة في 37 ℃ . . . . . . .

بعد الغسيل ، 100 μ ل TMB الركيزة أضيفت إلى كل حفرة ، واللون هو تجنب في 37 ℃ لمدة 15-20 دقيقة .

50 ميكرولتر يضاف إلى كل مسام لوقف رد فعل ( الحل يتحول الأزرق والأصفر ) .

5 - تحديد

في غضون 30 دقيقة ، التطوير التنظيمي قيمة 450nm الطول الموجي ( إشارة الطول الموجي 570-630nm ) تم قياسها باستخدام انزيم المسمى الصك .

خامساً - حساب النتائج

منحنى القياسية ( أربعة المعلمة المناسب ) تم رسمها باستخدام معيار تركيز الإحداثي السيني و التطوير التنظيمي قيمة الإحداثي الطولي .

على أساس قيمة التطوير التنظيمي من العينة ، الكثافة الفعلية تحسب معادلة الانحدار .

سادساً - مؤشرات الأداء

مؤشر المعلمة

حساسية ≤ 1.0 بيكوغرام / مل

مجموعة اختبار 15.63-1000 بيكوغرام / مل

السيرة الذاتية في لوحة الدقة < 10 ٪

معدل الاسترداد 83-113%

خصوصية لا عبر رد فعل مع الإنسان IL-2 و il-4 . . . . . . .

سابعاً - نقاط الاهتمام

الكاشف التخزين : لا تستخدم اللوح يجب أن تكون مختومة في 2-8 ℃ لتجنب الرطوبة . TMB الركيزة الحل يحتاج إلى تجنب الضوء .

عينة العلاج : تجنب استخدام عينات الدم أو الدهون ؛ ارتفاع تركيز العينة تحتاج إلى اختبار لتحديد تخفيف متعددة .

مواصفات التشغيل

تجنب فقاعات الهواء عند إضافة العينة ، بندقية رئيس يحتاج إلى استبداله .

التحكم في درجة الحرارة والوقت بدقة ضمن نطاق محدد لمنع التبخر .

مراقبة الجودة : كل دفعة من التجارب يجب أن يكون ثقب فارغ ( S0 ) و السلبية السيطرة .

نصائح السلامة : إنهاء السوائل التي تحتوي على حمض ، تحتاج إلى ارتداء القفازات العملية ؛ التخلص من النفايات حسب المخاطر البيولوجية .

ثامناً - فترة الصلاحية

مجموعة فعالة في 2-8 ℃ لمدة 6 أشهر ، بعد تفكيك المعايير الموصى بها في التعبئة والتغليف - 20 ℃ . . . . . . .

ملاحظة : أعلاه هو فقط لأنّ مرجع , هذا منتوج لأنّ البحث العلمي فقط ، لا تستخدم البيانات الفعلية ، التجربة يجب أن تتبع بدقة تعليمات أو استشارة المعلمين التقنيين .

حقوق انترلوكين 1 ، il-1 إليسا كيت الشركة دائما يلتصق إلى ال : يلتصق إلى الانضباط والالتزام بالقانون ، الانضباط الذاتي ، واسعة الإحسان ، يجرؤ على تحمل روح المبادرة كمعيار ، مع نوعية ممتازة وخدمات ممتازة للحفاظ على وتوسيع السوق ، إلى حد كبير تلبية احتياجات العملاء . [ وين - وين ] مع زبوناتنا , نا تطوير هدف . بينسون شريك تثق به . نحن مستعدّة أن يتعاون بإخلاص مع أنت أن يخلق مستقبل سابعة . بنسن كيت