الإنسان عامل نمو بطانة الأوعية الدموية ، vegf-a إليسا كيت

الإنسان عامل نمو بطانة الأوعية الدموية ، vegf-a إليسا كيت

نظرة عامة على المنتجات

إليسا كيت يستخدم للكشف عن تركيز VEGF - A في مصل الدم البشري ، البلازما ، خليط الأنسجة ، خلية ثقافة طاف . . . . . . . لأغراض البحث العلمي فقط .

تكوين عدة

قبل المغلفة لوحة microporous : 12 × 8 ( 96 ) أو 12 × 4 ( 48 ) قبل المغلفة مع الأجسام المضادة ضد القبض على vegf-a . . . . . . .

المعيار : مسحوق مجفف بالتجميد ، تحتاج إلى أن تكون مخففة مرتين بعد حل مع معيار المخفف ( التدرج في التركيز الموصى به : 10 , 3.33 , 1-11 , 0.37 , 0.12 , 0.04 , 0 نانوغرام / مل ) .

الكشف عن الأجسام المضادة - HRP ) : هورس راديش پراكسيداز المسمى anti-vegf-a الضد .

غسل العازلة : 20 × التركيز ، تمييع مع الماء المقطر في 1 : 20 .

الركيزة الحل : TMB لون السائل أ / ب ، 1 : 1 قبل الاستخدام ، نفاد في غضون 15 دقيقة .

إنهاء الحل : 2M الحل .

عينة مخفف : تستخدم في تمييع تركيزات عالية من العينات .

ختم الفيلم : 2 صحائف المستخدمة في ختم microporous لوحات في درجة حرارة الغرفة .

مبدأ التجربة

VEGF - A ملزمة مع الأجسام المضادة التي تم التقاطها من قبل المغلف على شكل " مستضد الضد " معقدة . بعد إضافة HRP العلامات للكشف عن الأجسام المضادة ، ساندويتش هيكل هو المشكلة . بعد الغسيل ، unconjugated المسألة أزيلت ، TMB الركيزة أضيفت إلى جعل اللون ( الأزرق ) و الحل توقف رد الفعل و يصبح أصفر . الامتصاصية ( التطوير التنظيمي ) في 450nm الطول الموجي ، وتركيز يتناسب مع التطوير التنظيمي .

الخطوات التجريبية

إعداد العينة

المصل / البلازما : الطرد المركزي لإزالة الجسيمات ، وتجنب انحلال الدم ؛ الحفاظ على ≤ 48 ساعة في 2-8 ℃ ، والحفاظ على المدى الطويل يجب أن تكون - 20 ℃ / - 80 ℃ ( تجنب تكرار التجميد والذوبان ) .

supernatants الخلوية : الطرد المركزي supernatants لتجنب تركيزات عالية من البروتيني .

إعداد كاشف

غسل السائل : عندما تتركز غسل السائل يتبلور في درجة حرارة الغرفة ، 40 ℃ حمام مائي يذوب ثم المخفف في 1 : 20 .

معيار المنتج : ضعف نسبة تمييع بعد حل مرة أخرى ، هو الآن في الاستخدام .

الركيزة : TMB / ب الحل 1 : 1 مختلطة ، والحفاظ على ضوء .

عملية تدفق

إضافة عينة : إضافة 100 ميكرولتر القياسية / عينة في كل حفرة ، احتضان في 37 ℃ لمدة 90 دقيقة .

غسل : تجفيف السائل في حفرة ، نقع في سائل الغسيل لمدة 1 دقيقة / مرة ، كرر 3 مرات .

إضافة الأجسام المضادة : 100 ميكرولتر HRP المسمى الأجسام المضادة أضيفت إلى كل حفرة ، احتضان في 37 ℃ لمدة 60 دقيقة .

غسل : تزامن الخطوة 2 .

اللون : 90 μ ل TMB الركيزة أضيفت إلى كل مسام و حضنت في 37 ℃ لمدة 15-20 دقيقة .

إنهاء : إضافة 100 μ ل إنهاء الحل في كل حفرة ، وقياس قيمة التطوير التنظيمي في غضون 30 دقيقة بعد الاختلاط .

حساب النتائج

منحنى القياسية التي تم الحصول عليها باستخدام معيار التركيز ( نانوغرام / مل ) الإحداثي السيني و التطوير التنظيمي قيمة الإحداثي الطولي .

تركيز محسوبة من خلال استبدال المنحنى حسب قيمة التطوير التنظيمي من العينة ، مضروبا في تخفيف متعددة للحصول على النتيجة .

خامساً - نقاط الاهتمام

الكاشف التخزين : لا تستخدم كاشف عدة تحتاج إلى 2-8 ℃ لتجنب الضوء ، صالحة لمدة 6 أشهر . إعادة حل القياسية يمكن أن تكون معبأة في التخزين البارد ، وتجنب تكرار التجميد والذوبان .

عينة العلاج : تجنب استخدام العينات الواردة ، ومنع HRP النشاط .

مواصفات التشغيل : نقل السوائل اللازمة لتجنب فقاعات الهواء ؛ غسل لمنع التلوث الصليب .

حماية السلامة : إنهاء السوائل التي تحتوي على حمض قوي ، تحتاج إلى ارتداء القفازات العملية .

سادساً - النتائج المتوقعة

الحساسية : ≤ 1.54 بيكوغرام / مل ( الفعلية في المواصفات ) .

الكشف عن مجموعة : مجموعة نموذجية من 3.12-200 بيكوغرام / مل ، بعض مجموعات من 62.5-2000 بيكوغرام / مل .

التكرار : intraplate / interplate معامل الاختلاف < 10 ٪ و 15 ٪ على التوالي .

سابعاً - الردود على الأسئلة المتداولة

س‌ : جعل لون الضوء أو الظلام ؟

‌أ : تعديل أوقات تخفيف العينة أو الحضانة؛ ضمان إعداد الركيزة الطازجة .

س : الانحراف المعياري الخطي ؟

‌أ : التحقق من إعادة حل العملية لتجنب فقاعات الهواء ؛ محل ماصة شفط .

ملاحظة : أعلاه هو فقط لأنّ مرجع , هذا منتوج لأنّ البحث العلمي فقط ، لا تستخدم البيانات الفعلية ، التجربة يجب أن تتبع بدقة تعليمات أو استشارة المعلمين التقنيين .

تيانجين Binsheng دائما تعتبر مراقبة الجودة باعتبارها حياة المؤسسة ، والسعي إلى تعزيز القدرة التنافسية للمؤسسات . الشركة دائما يلتصق إلى ال : يلتصق إلى الانضباط والالتزام بالقانون ، الانضباط الذاتي ، واسعة الإحسان ، يجرؤ على تحمل روح المبادرة كمعيار ، مع نوعية ممتازة وخدمات ممتازة للحفاظ على وتوسيع السوق ، إلى حد كبير تلبية احتياجات العملاء . [ وين - وين ] مع زبوناتنا , نا تطوير هدف . بينسون شريك تثق به . نحن مستعدّة أن يتعاون بإخلاص مع أنت أن يخلق مستقبل سابعة .