البوليمر العمود الكروماتوجرافى يلعب دورا هاما في تحليل الأغذية ، والرصد البيئي ، وتطوير الأدوية ، وما إلى ذلك بسبب مزاياه مثل مجموعة واسعة من حمض قاعدة المقاومة ، والاستقرار الكيميائية قوية ، وقوة ميكانيكية عالية ومعقدة مناسبة ركائز . ومع ذلك ، مع زيادة استخدام مرات ، الملوثات ( مثل البروتين ، الدهون ، قوية الاحتفاظ المواد العضوية ، وما إلى ذلك ) في العينة تدريجيا كثف على سطح العمود الكروماتوجرافى حشو أو سد المسام ، مما يؤدي إلى انخفاض كفاءة العمود ، وانخفاض درجة الانفصال ، الاحتفاظ الوقت الانجراف ، وهلم جرا . بالمقارنة مع استبدال العمود الكروماتوغرافي الجديد مباشرة ، تجديد العلاج العلمي يمكن أن تحسن بشكل فعال أداء العمود ، وإطالة أمد الحياة وخفض تكلفة التحليل . في هذه الورقة ، نوع من التلوث من البوليمر العمود الكروماتوجرافى هو ممشط ، طريقة تجديد وتشغيل النقاط الرئيسية هي شرح بالتفصيل .
المبادئ الأساسية وإعداد البوليمر العمود الكروماتوجرافى التجديد
جوهر تجديد العلاج هو اختيار نظام المذيبات المناسبة لإزالة الملوثات دون تدمير هيكل البوليمر حشو ( على سبيل المثال ، تجنب كسر الروابط عبر ربط المسام تشوه ) ، وفي الوقت نفسه حماية سلامة العمود السرير . أولا ، تحديد نوع من التلوث ، والتنبؤ خصائص الملوثات من خلال الجمع بين عينة مصفوفة ، على سبيل المثال ، غالبا ما تحتوي على البروتين من الملوثات في العينات البيولوجية . ثانيا ، جمع المعلومات الأساسية من العمود الكروماتوجرافى والتحقق من مواد التعبئة والتغليف ( على سبيل المثال ، البوليسترين دافنيلبنزين ، بولي ميثاكريليت ، الخ . ) ثالثا ، أداء العمود خط الأساس تم اختباره من قبل عدد من لوحات النظرية ، وفصل عامل التماثل من العينات القياسية ( على سبيل المثال ، خليط من البنزين سلسلة ) تم قياسها .
طريقة التجديد على أساس نوع التلوث
التلوث من البوليمر العمود الكروماتوجرافى يمكن تقسيمها إلى عكسها الامتزاز لا رجعة فيه ترسب التلوث . وينبغي اختيار استراتيجية عملية الاستخراج حسب آلية التفاعل بين الملوثات والحشو .
( أ ) عملية الاستخراج الانحدار التقليدية عكسها الامتزاز التلوث
بالنسبة للملوثات ( مثل معظم الجزيئات العضوية الصغيرة و بعض الشوائب القطبية ) التي هي ضعيفة إلى متوسطة القوة في العينة ، عملية الاستخراج الانحدار يمكن استخدامها لتعزيز قوة المذيبات عملية الاستخراج ، وبالتالي تحقيق الامتزاز من الملوثات . هذا الأسلوب هو مناسبة للصيانة الروتينية من التلوث الخفيف ، خطوات عملية محددة هي كما يلي : أولا ، استخدام المرحلة المحمول الأولي ( مثل الميثانول نظام المياه ) في انخفاض معدل تدفق 0.5ml / min شطف العمود 10 حجم ( السيرة الذاتية ) ، وإزالة بقايا العينة في العمود . في وقت لاحق ، نسبة عالية من المذيبات eluent زادت تدريجيا ، على سبيل المثال ، من الميثانول إلى الماء ( 50 : 50 ، ت / ت ) إلى الميثانول النقي ( 100 ٪ ) ، مع الحفاظ على معدل تدفق 0.8ml / min 15-20cv . إذا كان عكس المرحلة الكروماتوغرافي و الملوثات تحتوي على المكونات القطبية ، 10 cv يمكن غسلها مع الميثانول الأسيتونيتريل ( 50 : 50 ، ت / ت ) . وأخيرا ، 10-15cv التوازن الأولي مع مرحلة الجوالة حتى خط الأساس هو مستقر . هذه الطريقة يمكن أن تقلل من الضرر من البوليمر حشو ، وعموما يمكن أن تصل إلى أكثر من 85 ٪ من الانتعاش بعد التجديد .
` 2 ` تجديد المذيبات الخاصة الملوثة بالمواد العضوية المحجوزة بشدة
عندما تحتوي على الهيدروكربونات العطرية المتعددة الحلقات ( PAHs ) و سلسلة طويلة من الأحماض الدهنية ( LFA ) ، من الصعب إزالة التقليدية عملية الاستخراج الانحدار . ثلاث خطوات عملية الاستخراج من الميثانول إلى رباعي هيدرو الفوران والميثانول يوصى البوليسترين دافنيلبنزين ( ps-dvb ) العمود : أولا ، 10 السيرة الذاتية تم غسلها مع الميثانول النقي لإزالة بقايا السطح ، ثم تم غسلها مع رباعي هيدرو الفوران ( THF ) كما eluent قوية ، 20-30cv تم غسلها مع 0.3ml / min على سرعة منخفضة ، مسعور الامتزاز الملوثات تم تجريده من الذوبان قوية من THF . بسبب تأثير طفيف على تورم THF البوليمر حشو ، 15cv يجب غسلها مرة أخرى مع الميثانول النقي ، ثم حجم المسام من حشو هو تقلص تدريجيا و بقايا THF هو مزال . وأخيرا ، مرحلة التوازن الأولي تدفق المستخدمة . إذا كان التلوث هو مادة قطبية قوية ( مثل مركبات أمينية ) ، 0.1 في المائة ( TFA ) يمكن أن تضاف إلى نظام الاستخراج ، قطبية التفاعل يمكن أن تضعف من خلال تعديل قيمة الرقم الهيدروجيني ، ولكن تركيز TFA لا ينبغي أن تتجاوز 0.5 في المائة ، بعد التجديد ، 5 السيرة الذاتية يجب أن يكون تحييد وغسلها مع الميثانول الحل الذي يحتوي على 0.05 في المائة من الأمونيا المياه ، وذلك لتجنب حمض بقايا تآكل العمود السرير .
( 3 ) مجمع المذيبات تجديد والتحلل الأنزيمي biomacromolecule التلوث
بعد تحليل العينات البيولوجية ( على سبيل المثال ، مصل الدم ، البول ، المستخلصات النباتية ) ، البروتين ، الحمض النووي ، السكاريد ، وغيرها من الجزيئات البيولوجية بسهولة كثف على سطح البوليمر حشو من خلال مسعور أو الرابطة الهيدروجينية ، أو حتى شكل هلام ترسب سد المسام ، تأثير بسيط المذيبات eluent محدودة . أولا ، حل العازلة ( ph7.0 الفوسفات عازلة تحتوي على التربسين ، تركيز 0.1mg / ml ) تم إعدادها ، ثم العمود الكروماتوجرافى 30 السيرة الذاتية تم غسلها في 0.2ml / min معدل التدفق . بعد ذلك ، تم غسلها مع 5 ٪ من الميثانول 10 السيرة الذاتية لإزالة انزيم المتبقية ، ثم تم غسلها مع التدرج في تسلسل " الماء الميثانول الأسيتونيتريل الميثانول " . وأخيرا ، 5 السيرة الذاتية ( تثبيط نمو الكائنات الحية الدقيقة ) تم غسلها مع الميثانول الحل الذي يحتوي على 0.01 ٪ أزيد الصوديوم و مختومة مع الميثانول النقي . . . . . . . طريقة تجديد التلوث البيولوجي العمودنظرية صينية عدد يمكن استردادها إلى أكثر من 80 ٪ من العمود الجديد .
غسل وتجديد الأملاح والجسيمات الملوثة
عندما تحتوي المرحلة المحمول العازلة الملح ( مثل الفوسفات ، خلات الأمونيوم ) أو عينة تحتوي على الجسيمات العالقة ، فمن السهل أن تشكل التمليح تبلور أو ترسب الجسيمات في مدخل العمود ، مما يؤدي إلى زيادة غير طبيعية في ضغط العمود . التركيز على تجديد هذا النوع من التلوث هو " انخفاض كثافة حل + شطف المادية " : أولا ، العمود الكروماتوجرافى هو ربط عكسيا ( تجنب الملوثات في عمق العمود السرير ) و 20 السيرة الذاتية هو غسلها في سرعة منخفضة مع 0.3 مل / دقيقة من المياه النقية ، ثم الملح يذوب في التبلور . إذا كان العمود الضغط لا يزال مرتفعا ، 15 السيرة الذاتية يمكن غسلها مع 5 ٪ من الميثانول بدلا من ذلك . من أجل صهر الجسيمات ، ثلاث دورات يمكن غسلها بالتناوب من قبل " الماء - الميثانول - الماء " و الرواسب يمكن تجريده من قوة القص الناتجة عن تغيير المذيبات اللزوجة . علما بأن الضغط يجب أن لا تتجاوز العمود الكروماتوجرافىبعد التجديد ، يجب أن تكون متصلا إلى الأمام ، وذلك باستخدام تدفق الأولية مرحلة التوازن إلى خط الأساس لتحقيق الاستقرار .
ثالثا - المسائل الرئيسية التي تحتاج إلى اهتمام في عملية التجديد و تقييم الأثر
أربعة مبادئ يجب اتباعها بدقة : أولا ، السيطرة على سرعة التدفق والضغط ، تبدأ مع انخفاض سرعة التدفق ( 0.3-0.8ml / min ) في العملية برمتها ، وتجنب انهيار عمود السرير بسبب الضغط المفاجئ ، ذروة الضغط لا يتجاوز الحد الأعلى المنصوص عليه في المواصفات . ثانيا ، تجنب تغيير مفاجئ في المذيبات ، المذيبات المختلفة التبديل يجب أن تعتمد التدرج ( على سبيل المثال ، عندما الميثانول إلى THF التبديل ، ضبط نسبة 10 ٪ التدرج تدريجيا ) لمنع المذيبات القطبية تغيير مفاجئ يسبب تورم حشو غير موحدة . ثالثا ، من المحرمات المذيبات ، على سبيل المثال ، بولي ميثاكريليت البوليمر العمود تجنب استخدام الكلوروفورم ، ثنائي كلورو ميثان وغيرها من المذيبات الهيدروكربونية المهلجنة ، ps-dvb العمود لتجنب التعرض الطويل الأجل قوية المذيبات القلوية ( الرقم الهيدروجيني > 12 ) ؛ رابعا ، بعد تجديد حماية الختم ، على المدى القصير لا تستخدم عند استخدام الميثانول النقي أو الأسيتونيتريل الختم ، التخزين على المدى الطويل تحتاج إلى استبدال ختم المذيبات بانتظام ( كل 3 أشهر ) .
ثلاثة مؤشرات أساسية ينبغي التحقق منها من أجل تقييم تأثير التجديد : نظرية صينية عدد ( أكثر من 50 ٪ أكثر فعالية من قبل التجديد ) ، فصل ( ذروة فصل المتاخمة استعادة أكثر من 1.5 ) و الانحراف المعياري النسبي ( RSD < 2 في المائة ) . إذا كانت درجة الفصل من العينات القياسية لا تزال أقل من 1.0 أو زيادة الضغط أكثر من 50 ٪ من العمود الجديد بعد التجديد ، فإنه يدل على أن العمود الجديد لا يمكن تجديد بفعالية .
رابعاً - ملاحظات ختامية
تجديد تأثير البوليمر العمود الكروماتوجرافى يعتمد على دقة الحكم على نوع من التلوث ومدى ملاءمتها تجديد الأسلوب . في الاستخدام اليومي ، ينبغي إنشاء نموذج إدارة " الوقاية أولا ، متدرج التجدد " : الحد من الملوثات من خلال عينة المعالجة ( مثل الترشيح ، استخراج ) ، وإجراء عملية الاستخراج الانحدار خفيفة الصيانة العادية . تجديد استراتيجيات مثل حل بالإنزيم ، مذيب خاص ، وما إلى ذلك يتم اختيارها بدقة وفقا لمختلف أنواع التلوث ، ومعايير التشغيل يتم التحكم بدقة . تجديد العلاج العلمي ليس فقط يمكن أن تقلل بشكل كبير من تكلفة المواد الاستهلاكية في المختبر ، ولكن أيضا يمكن أن تضمن دقة وموثوقية البيانات التحليلية من خلال الحفاظ على استقرار أداء العمود ، وتوفير دعم قوي من أجل تطوير كفاءة عالية من التحليل الكروماتوغرافي السائل . . .