-
البريد الإلكتروني
yang.chen4@thermofisher.com
-
الهاتف
13386161207
-
العنوان
شينجينكياو
Thermo Fisher Scientific (China) Co., Ltd
التقييم الانتقائي مثبط كيناز البروتين باستخدام hyperdepth الفسفرة البروتيوميات
التاريخ:2025-08-26اقرأ:0
فوسفوريليشن البروتين هو شكل شائع من posttranslation تعديل في الخلايا حقيقية النواة ، ويلعب دورا هاما في الخلية إشارة تنبيغ ، الخلية عملية تنظيم وظيفة البروتين . فوسفوريليشن البروتين هو نقل مجموعة الفوسفات في محطة أدينوسين ثلاثي الفوسفات ( ATP ) سيرين ، ثريونين ، التيروزين المخلفات من البروتين الأساسي من خلال بروتين كيناز . الطفرات الجينية أو غير طبيعية في التعبير عن بروتين كيناز يؤدي إلى الإفراط في تنشيط كيناز ، مما يؤدي إلى السرطان وغيرها من الأمراض . ولذلك ، بروتين كيناز أصبحت واحدة من أهم الأهداف المضادة للورم المخدرات . في الوقت الحاضر ، أكثر من 80 أنواع من مثبطات كيناز ( PKI ) تم الموافقة عليها في السوق العالمية ، وهناك حوالي 180 أنواع من مرافق المفاتيح العمومية في التجارب السريرية . ومع ذلك ، فإن تطوير مرافق المفاتيح العمومية المخدرات لا تزال تواجه العديد من التحديات ، ولا سيما استهداف انتقائية تفوت الهدف سمية . في الوقت الحاضر ، فإن التقييم الانتقائي مرفق المفاتيح العمومية يعتمد أساسا على مئات من استنساخ وتنقية البروتين كينيز ، أو خطوط الخلايا المعدلة وراثيا عالية عن الهدف كيناز . تنقية كيناز لا يمكن أن تعكس حقا انتقائية مرفق المفاتيح العمومية في الخلية بسبب فصلها عن البيئة الخلوية . اختبار الخلايا المعدلة وراثيا يقتصر على تحديد الهدف كيناز . لحل هذه المشكلة ، كانغ jingwu فريق البحث ، الدولة الرئيسية مختبر جزيء صغير تنظيم عملية الحياة ، معهد شنغهاي الكيمياء العضوية ، الأكاديمية الصينية للعلوم
البروتين الفسفرة هو دينامية للغاية ، وانخفاض وفرة ( phosphoproteome فقط 0.1 في المائة من مجموع البروتيوميات ، التيروزين phosphoproteome فقط 0.1-1 ٪ ) ، وبالتالي فإن تركيز فسفرته الببتيد هو خطوة رئيسية في تحليل الطيف الكتلي . من أجل قياس بدقة الفسفرة الأحداث الناجمة عن مرافق المفاتيح العمومية ، على أساس سلسلة من microcolumn كروماتوجرافيا الألفة ( انال chem2020 , 92 , 3913-3922 ي بروتيوم Res 2023 , 22 , 2450-2459 انال chem.2023 , 95 , 8605-8612 ) ، استراتيجية متكاملة من ثلاثة أنواع من انتقائية مكملة فسفرته الببتيد إثراء المواد المقترحة .
الشكل 1 تخطيطي وتحليل تدفق البيانات من عمق الفسفرة الفسفرة البروتيوميات ( انظر الرسم البياني ) .
باستخدام زيبوتينيب كنموذج ، الفسفرة مستوى 25 مواقع الفسفرة من 25 البروتينات زيادة كبيرة ، الفسفرة مستوى 72 مواقع الفسفرة من 66 البروتينات انخفضت بشكل ملحوظ ( نسبة الفسفرة التيروزين هو 80.9 في المائة ) . في البيانات التي تم جمعها من ضياء ، الفسفرة مستوى 91 مواقع الفسفرة 80 البروتينات زيادة كبيرة ، الفسفرة مستوى 167 البروتينات انخفضت بشكل ملحوظ ( معظمها سيرين ثريونين الفسفرة / مواقع ) ( الشكل 2 ) .
الشكل 2 - التغيرات في الخلايا اللمفاوية B فسفرته الأحداث الناجمة عن zebutinib كشفت تحليل عميق جدا الفسفرة البروتيوميات .
التين 3 . مثبط أو تفعيلها من قبل zebutinib كيناز البروتين و العمليات الخلوية المشاركة
( انقر على عرض الصورة الكبيرة )
بالإضافة إلى تثبيط BCR و FCR مسارات الإشارات ، zebutinib ينظم الخلايا باء ، EGFR ، erbb rptk , و MAPK تتالي مسارات الإشارات ( الشكل 3 ) . ومن المثير للاهتمام أن هذه النتائج تشير إلى أن zebutinib ليس فقط يمنع العديد من مسارات الإشارات الرئيسية في البنك التونسي للتضامن و المصب ، ولكن أيضا زيادة الفسفرة من raf1 ، وبناء القدرات ، ptpn11 البروتينات ، وبالتالي تفعيل erk1 / 2 MAPK بوساطة ردود فعل سلبية في تنظيم BCR مسارات الإشارات ، ومنع تنبيغ الإشارة المنبع من BCR مسارات الإشارات . مقارنة مع أهداف زيبوتينيب ذكرت في الأدب ، وهي وضع استراتيجيات عميقة جدا الفسفرة البروتيوميات التي يمكن الحصول على المزيد من المعلومات عن أهداف العمل ( أو تفوت الهدف ) في تدفق عالية على مستوى الخلايا الحية . من خلال الخريطة فسفرته الأحداث في مسارات الإشارات الخلوية ، آلية عمل زيبوتينيب يمكن الكشف عنها بشكل بانورامي ( الشكل 4 ) .
الشكل 4 - ممكن الآليات الجزيئية الدوائية زيبوتينيب كشفت عن عمق الفسفرة البروتيوميات ( انقر على الصورة الكبيرة ) .
وباختصار ، فإن تحليل عميق جدا الفسفرة البروتيوميات يمكن ليس فقط تقييم كامل الانتقائية مثبطات كيناز البروتين على مستوى الخلية مع تدفق عالية ، وحساسية عالية ، وموثوقية عالية ، ولكن أيضا الكشف عن آلية أكثر دقة من خلال تحليل المخدرات التي يسببها الفسفرة تتالي ردود الفعل . وبالإضافة إلى ذلك ، فإن هذه التكنولوجيا يمكن أن تستخدم على نطاق واسع في نقل الإشارة في علم الأحياء الخلوي . تشانغ يوي ، وهو طالب دكتوراه في معهد شنغهاي الكيمياء العضوية ، الأكاديمية الصينية للعلوم ، هو أول مؤلف ورقة ، الباحث في معهد شنغهاي الكيمياء العضوية ، الأكاديمية الصينية للعلوم شكرا لك على المساعدة في تحليل أسترال . بدعم من المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين ( NSFC ) ، والأكاديمية الصينية للعلوم ( كاس ) و بلدية شانغهاى للعلوم والتكنولوجيا اللجنة .
المقالة الأخيرة:" نوعية " في الاستكشاف ، والتركيز على الابتكار
المقالة التالية:خصائص وتطبيقات فائقة الدقة مطياف الكتلة