تورو نيشيكاوانشرت من قبل فريقو … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … .مجلة الكلية الدولية لطب الأسنانقدراسةبالستربتوزوتوسين )STZإنشاء نموذج الفئران المصابة بداء السكري التي يسببها التهاب اللثة التجريبيةلامسارالتركيزللتحقيق في آلية تدهور اللثة في مرض السكري ، مع التركيز على تحليل تدفق الدم اللثة والتهاب الجينات ذات الصلةألفا/TNF ألفامحرض سينسيز اكسيد النيتريك ، iNOS/ إينوسالتعبير عن nitrosotyrosine و nitrosotyrosine الإجهاد علامة .

خلاصة

الهدف من دراسة آلية تدهور اللثة في المرضى الذين يعانون من مرض السكري .STZإنشاء نموذج الفئران المصابة بداء السكري التي يسببها التهاب اللثة التجريبيةلامسارالتركيزبدء المناقشة .

المواد والأساليب 5 ذكر الأسبوعSDالفئران عن طريق حقن إينترابيريتونيلSTZ( أ )60 ملغ / كجممرض السكري المستحث .STZحقن2 الرحى الثانية في الفك العلوي الأيمن )M2ربط عنق الأسنان بخيوط النايلون )صور جيلونالتهاب اللثة الناجم عن هذا الجانب التجريبي . الجانب الآخر لا تعامل مثل السيطرة على الجانب . التهاب اللثة الناجم عن التجريبية2 بعد أربعة أسابيع ، تم قياس تدفق الدم في أنسجة اللثة ، ثم الفئران أعدموا .

النتائج : تدفق الدم إلى اللثة في السيطرة على الفئران المصابة بداء السكري كان أقل بكثير من ذلك في السيطرة على الفئران . تدفق الدم في أنسجة اللثة بعد التهاب اللثة الناجم عن زيادة كبيرة في كل من الفئران العادية و الفئران المصابة بداء السكري . تحليل التعبير الجيني أظهرت أن الفئران العاديةTNF- ألفاعلى الرغم من أن هناك زيادة في التعبير الجيني ، لا توجد فروق ذات دلالة إحصائية .iNOSزيادة كبيرة في التعبير الجيني . في الفئران المصابة بداء السكري ، التهاب اللثة الناجم عنTNF- ألفامع .iNOSزيادة كبيرة في التعبير الجيني . الفحص النسيجي أظهرت أن التهاب اللثة الناجم عن الموقع في الفئران العادية فقط معتدل تسلل الخلايا الالتهابية ، في حين أن الفئران المصابة بداء السكري أظهرت موقع كبير تسلل الخلايا الالتهابية . مزيد من التحليل على التعبير عن nitrotyrosine في أنسجة اللثة أظهرت أن nitrotyrosine الخلايا الإيجابية يمكن العثور عليها في اللثة الناجم عن الفئران العادية ، ولكن عدد الخلايا الإيجابية nitrotyrosine زيادة كبيرة بعد التهاب اللثة الناجم عن السكري في الفئران .

الخلاصة : عدد الخلايا الإيجابية في أنسجة اللثة nitrotyrosine زيادة كبيرة في الفئران المصابة بداء السكري . وفي الوقت نفسه ، تثبيط nitroso الإجهاد قد تكون واحدة من الاستراتيجيات العلاجية لمرض السكري المرتبطة التهاب اللثة .

تجربة .المواد والأجهزة

( أ ) المواد التجريبية

1. حيوانات المختبر5 ذكر الأسبوعSDجرذان

2. السكري المستحث : استرپتوزوتوسین )STZونالمواد التي يسببها أمراض اللثة : خيوط النايلون )صور جيلونونمخدر )بينتوباربيتالو

` 2 ` الأدوات التجريبية

1. أوميجاويف فلو-N1ليزر دوبلر مقياس الجريان، لقياس تدفق الدم في أنسجة اللثة

أوميجاويف فلو-N1ليزر دوبلر مقياس الجريان

تدفق الدم في أنسجة اللثة

2. مضان الكمية في الوقت الحقيقيالـ PCRالتحليل الكمي في التعبير الجيني

3. المجهر الضوئي : الملاحظة بعد تلطيخ الأنسجة والخلايا العد

4. انخفاض درجة الحرارة معدات التخزين : النيتروجين السائل الدبابات ( الأنسجة التجميد السريع )-80℃الثلاجات ( التخزين على المدى الطويل الأنسجة )

5. وسادة التدفئة : يستخدم لقياس تدفق الدم اللثة عند الحفاظ على درجة حرارة المستقيم في الفئران37℃

عملية تجريبية

( أ ) تغذية الحيوانات المختبرية وإنشاء نموذج لمرض السكري

1. الكلSDتغذية الفئران في درجة حرارة ثابتة )23±1.0℃ثابت الرطوبة )45 ± 10%غرفة الحيوان12 فائدة نموذج يمكن أن توفر المياه الجارية من خلال إمدادات المياه التلقائية الجهاز .

2. حقن إينترابيريتونيل في الفئرانSTZ( أ )60 ملغ / كجم( للحث على مرض السكري؛STZحقن1 بعد أربعة أسابيع ، تم قياس نسبة السكر في الدم≥200mg / دلترالفئران التي تم تحديدها على أنها السكري نموذج الفئران .

التهاب اللثة الناجم عن التجريبية

STZحقن2 جميع الفئران ( الفئران العاديةسالفئران المصابة بداء السكري )0.5 ملغ / كجمالحقن داخل الصفاق ) تحت التخدير ، الرحى الثانية على الجانب الأيمن للفك العلوي )M2خيط خياطة نايلون ) لف عنق الأسنانصور جيلونفي محاولة لتجنب تلف اللثة ، في أقرب وقت ممكن في القلب تغطي عقدة ثابتة ( هذا الجانب هو الجانب التجريبي ) ؛ الأضراس الثانية من الفك العلوي الأيسر لا تعامل ( السيطرة على الجانب ) .

قياس تدفق الدم في أنسجة اللثة

1. التهاب اللثة الناجم عن حقن إينترابيريتونيل )0.5 ملغ / كجمتخدير الفئران ، ليزر دوبلر مقياس الجريان )فلو-N1المسبار هو ثابت على الجانب التجريبي وعلى الجانب المقابلM2فوق اللثة الشدق مباشرة .

2. أثناء القياس ، الفئران25℃الحرارة وسادة للحفاظ على درجة حرارة المستقيم37℃، سجلت قيمة تدفق الدم ( الوحدة :مل / دقيقة / 100g الأنسجة. لا

( د ) اقتناء وتجهيز المنظمات

1. التهاب اللثة الناجم عن التجريبية 2 بعد أسابيع من الحقن داخل الصفاق )1.5 ملغ / كيلوغرامقتل الفئران .

2. الحصول على الجانب التجريبي و السيطرة على الجانبM2الأنسجة اللثوية الشدق : على الفور وضع جزء في النيتروجين السائل بسرعة المجمدة ، ثم نقلها إلى- 80℃الحفاظ على الثلاجة ( تحليل التعبير الجيني ) ؛ الجزء الآخر ، جنبا إلى جنب مع الثنائي الفكي الأنسجة إزالتها ووضعها في10%الفورمالين الحل التثبيت24 ساعات ( المستخدمة في التحليل النسيجي ) .

تحليل التعبير الجيني

1. مستعملTRIzol المفاعلمجموع استخراج من أنسجة اللثة المجمدةالرنا، ثم أخذ مجموعالرناقالبSuperscriptIII RNase H- النسخة العكسيةالاصطناعيةcDNAمنتدى

2. اعتمدتاكمان Universal PCR Master Mixمع .تاكمانتحقيقاتABI بريزم 7000تنفيذ الصكالـ PCRرد فعل الشرط95℃ 1دقيقة52℃ 1دقيقة72℃ 30ثانية40 دورة .

3. أخذغابدالجينات المرجعية الداخليةΔΔCtطريقة الحسابTNF- ألفامع .iNOSالتعبير الجيني .

النتائج التجريبية

وأظهرت النتائج أن عدد الخلايا الإيجابية nitrotyrosine زيادة كبيرة في أنسجة اللثة من الفئران المصابة بداء السكري . وفي الوقت نفسه ، تثبيط nitroso الإجهاد قد تكون واحدة من الاستراتيجيات العلاجية لمرض السكري المرتبطة التهاب اللثة .